La sintezo de nuklea acido estas efektivigita per la solidfaza sialamida trigliceridmetodo, per kio la 3′ fino de la DNA estas senmovigita sur solidfaza substrato kaj nukleotidoj estas aldonitaj en la 3′ ĝis 5′ direkto ĝis la dezirata DNA-fragmento estas sintezita. .Tio devias de DNA-sintezo per la apliko de DNA-polimerazo.
La 3′ fino de la unua bazo estas senmovigita sur CPG dum sintezo, la 5′-OH de la sekva bazo estas protektita per di-p-tolil tritil DMT, la aminogrupo sur la bazo estas protektita per benzoika acido kaj la 3′ -OH tiam estas aktivigita kun aminofosfata kunmetaĵo.1 bazo de la 5 5′-OH de 1 bazo kaj 3′-OH de la sekva bazo formas fosfittrigliceridon, kiu tiam estas oksigenita kun jodo al fosfata triglicerido, la protektanto sur la dua bazo 5′-OH estas forigita per aldonado de dikloroaceta acido DM cikloj per aldono de la sekva bazo, kaj post sintezo la protektanto sur la 5′-OH estas forigita per malforta acido La fragmento estas malkonektita de la solida rezino kun koncentrita amonia hidroksido, la protektanto estas forigita de la bazo. kun koncentrita amonia hidroksido sub hejtado, la amonia hidroksido estas forigita, la fragmento estas vakue sekigita, kaj la nuklea acido estas purigita per likva kromatografio aŭ PAĜO.
Paŝoj de Oligo-Sintezo
Malblokado
La5-fina DMT-protekta grupo estas forigita aldonante TCA-solvon.
Aktivigo
Miksante la aktiviganton kun la oligonukleotidmonomero por formi la aktivan oligonukleotidmonomeran mezan.
Kuplado
La 5-fina hidroksilgrupo reagas kun la aktiva oligonukleotida meza en kontraŭ-genera kondensadreago por formi malstabilan fosfittrigliceridan ligon.
Kapado
La aldono de ĉapa agento elfaras acetiligan ĉapreagon kun troaj hidroksilgrupoj kiuj ne estas implikitaj en la kondensadreago.
Oksigenado
La aldono de joda solvaĵo enhavanta akvon reagas kun malstabilaj fosfitaj ligoj per oksigenado por formi stabilajn fosforacidajn trigliceridajn ligojn.
Cianoetilo Fendado
La nuklea acida produkto post sintezo, kun la aldono de DEA-solvo por forigi la cianoetilgrupon de la fosfata triglicerida ligo.
Fendita&Malprotekto
La nukleaacidofragmentoj estas fenditaj de la solidfaza portanto aldonante densan amonian hidroksidan solvaĵon kaj tiam varmigitaj por forigi la protektajn grupojn de la hidrogenaj ligoj de la bazoj.
Afiŝtempo: Nov-21-2022